Western Blot

웨스턴 블랏(Western Blot)은 특정 단백질을 검출하고 분석하는 방식으로 크게 단백질 분리 전이, 검출의 세가지 주요 단계를 포함한다.1. 단백 전기 영동(SDS-PAGE)SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)는 단백질을 분자량에 의해서 분리하는 과정이다.SDS는 단백질을 변성시키고 음전하를 부여하고 단백질이로 분리되도록 한다.폴리 아크릴 아미드 겔은 전기장을 적용하고 단백질을 크기에 의해서 이동시키는 매트릭스를 제공한다.작은 단백질은 더 빨리 이동하고 큰 단백질은 천천히 이동한다.2. 단백질 전이(Transfer)SDS-PAGE에 분리된 단백질을 폴리 아크릴 아미드 겔에서 나이트에 셀룰로오스(Nitrocellulose)과 PVDF(Polyvinylidene Fluoride)막에 전이한다.전이는 전기장을 사용하고 단백질을 겔이 막으로 이동시키는 과정입니다.이 과정에서 단백질은 막에 결합되어 고정된다.3. 단백질 검출(Detection)차단:막의 비특이적 결합을 막기 위한 불활성 단백질(예:탈지 분유)를 사용하고 막기 처리하다.1차 항체 반응:특정 단백질에 결합하는 1차 항체를 막에 첨가하여 목표, 단백질과 결합하도록 한다.2차 항체 반응:1차 항체에 결합하는 2차 항체를 첨가합니다.이 항체는 효소나 형광 물질로 표시되고 있어 검출이 가능하다.검출:효소 표시된 2차 항체의 경우 기질을 첨가하여 발광 반응을 통하여 단백질을 검출합니다.형광 표시된 2차 항체의 경우 발광 신호를 검출한다.이론적으로는 간단한 실험이지만.생각보다 준비 단계는 매우 많다.(‘;ω;`)웨스턴 블랏(Western Blot)은 특정 단백질을 검출하고 분석하는 방식으로 크게 단백질 분리 전이, 검출의 세가지 주요 단계를 포함한다.1. 단백 전기 영동(SDS-PAGE)SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)는 단백질을 분자량에 의해서 분리하는 과정이다.SDS는 단백질을 변성시키고 음전하를 부여하고 단백질이로 분리되도록 한다.폴리 아크릴 아미드 겔은 전기장을 적용하고 단백질을 크기에 의해서 이동시키는 매트릭스를 제공한다.작은 단백질은 더 빨리 이동하고 큰 단백질은 천천히 이동한다.2. 단백질 전이(Transfer)SDS-PAGE에 분리된 단백질을 폴리 아크릴 아미드 겔에서 나이트에 셀룰로오스(Nitrocellulose)과 PVDF(Polyvinylidene Fluoride)막에 전이한다.전이는 전기장을 사용하고 단백질을 겔이 막으로 이동시키는 과정입니다.이 과정에서 단백질은 막에 결합되어 고정된다.3. 단백질 검출(Detection)차단:막의 비특이적 결합을 막기 위한 불활성 단백질(예:탈지 분유)를 사용하고 막기 처리하다.1차 항체 반응:특정 단백질에 결합하는 1차 항체를 막에 첨가하여 목표, 단백질과 결합하도록 한다.2차 항체 반응:1차 항체에 결합하는 2차 항체를 첨가합니다.이 항체는 효소나 형광 물질로 표시되고 있어 검출이 가능하다.검출:효소 표시된 2차 항체의 경우 기질을 첨가하여 발광 반응을 통하여 단백질을 검출합니다.형광 표시된 2차 항체의 경우 발광 신호를 검출한다.이론적으로는 간단한 실험이지만.생각보다 준비 단계는 매우 많다.(‘;ω;`)